Análise de alterações na expressão de genes relacionados com a imunidade inata em células humanas infectadas com Apeu virus

A família Bunyaviridae consiste em uma das maiores e mais diversificadas famílias de vírus de RNA, contendo cerca de 350 vírus sorologicamente distintos. O Apeu virus (APEUV) é um vírus da família Bunyaviridae que se destaca por seu grande potencial emergente. Isolado pela primeira no Brasil, este vírus pode causar uma doença que apresenta sintomas semelhantes aos da gripe, como febre alta, dor de cabeça e mialgia, associadas geralmente a náuseas, vômitos, fraqueza e fotofobia. Entretanto, apesar de seu potencial patogênico, pouco se sabe sobre a sua interação com o sistema imunológico humano. Com o objetivo de estudar alguns aspectos da resposta imune, principalmente a reposta inata desencadeada pela infecção do APEUV, a expressão de 19 genes (TLR3, TLR7, TLR8, TLR9, MyD88,IRF3, IRF5, IRF7, IRF9, IRAK4, TRAF3, TRAF6, TICAM1, JUN, ROBO-3(RIG-1),IFIH1(MDA-5), IFNα, IFNβ, IFNy) foi analisada. Para tal, foram feitos ensaios de qPCR baseados na metodologia TaqMan®, utilizando cDNA obtido a partir de RNA total extraído de células mononucleares do sangue periférico (PBMC) e de células A549 (linhagem derivada de carcinoma pulmonar humano), infectadas ou não com APEUV por períodos de 4 ou 8 horas.

Como controles, foram utilizadas células infectadas com o vírus da estomatite vesicular (VSV) como controle positivo de uma infecção por vírus de RNA fita simples, e células tratadas com o mock das amostras de vírus como controle negativo. Os dados obtidos foram analisados em software específico. Nossos resultados indicam que PBMC infectadas com APEUV por 4horas (m.o.i.=1 e m.o.i.=3) induzem um aumento na expressão de TLR9 e IFNβ. Quando quantificada a expressão de genes em células A549 infectadas com APEUV(m.o.i.=1 por 4 horas) comparadas com o mock, verificou-se um aumento da expressão dos genes TLR9, IRF3 e IRF7 e no período de 8 horas, também comparando com o mock, verificou-se aumento de forma significativa na expressão de TLR 9, além de um aumento na expressão de TLR3, TLR7, TRAF3 , IRF7 e IFNβ.Verificamos ainda que, após escolher um gene housekeeping através de método estatístico, células A549 infectadas com APEUV em uma m.o.i.=1, tende a aumentara expressão dos genes IFNβ e TICAM-I, fundamentais na indução de um estado celular antiviral. Estudos posteriores são necessários para a determinação dos mecanismos envolvidos na resposta imune inata humana contra o Apeu virus.

Análise de alterações na expressão de genes relacionados com a imunidade inata em células humanas infectadas com Apeu virus / Analysis of changes in the expression of genes related to innate immunity in human cells infected with virus Apeu

A família Bunyaviridae consiste em uma das maiores e mais diversificadas famílias de vírus de RNA, contendo cerca de 350 vírus sorologicamente distintos. O Apeu virus (APEUV) é um vírus da família Bunyaviridae que se destaca por seu grande potencial emergente. Isolado pela primeira no Brasil, este vírus pode causar uma doença que apresenta sintomas semelhantes aos da gripe, como febre alta, dor de cabeça e mialgia, associadas geralmente a náuseas, vômitos, fraqueza e fotofobia. Entretanto, apesar de seu potencial patogênico, pouco se sabe sobre a sua interação com o sistema imunológico humano. Com o objetivo de estudar alguns aspectos da resposta imune, principalmente a reposta inata desencadeada pela infecção do APEUV, a expressão de 19 genes (TLR3, TLR7, TLR8, TLR9, MyD88,IRF3, IRF5, IRF7, IRF9, IRAK4, TRAF3, TRAF6, TICAM1, JUN, ROBO-3(RIG-1),IFIH1(MDA-5), IFNα, IFNβ, IFNy) foi analisada. Para tal, foram feitos ensaios de qPCR baseados na metodologia TaqMan®, utilizando cDNA obtido a partir de RNA total extraído de células mononucleares do sangue periférico (PBMC) e de células A549 (linhagem derivada de carcinoma pulmonar humano), infectadas ou não com APEUV por períodos de 4 ou 8 horas...

Como controles, foram utilizadas células infectadas com o vírus da estomatite vesicular (VSV) como controle positivo de uma infecção por vírus de RNA fita simples, e células tratadas com o mock das amostras de vírus como controle negativo. Os dados obtidos foram analisados em software específico. Nossos resultados indicam que PBMC infectadas com APEUV por 4horas (m.o.i.=1 e m.o.i.=3) induzem um aumento na expressão de TLR9 e IFNβ. Quando quantificada a expressão de genes em células A549 infectadas com APEUV(m.o.i.=1 por 4 horas) comparadas com o mock, verificou-se um aumento da expressão dos genes TLR9, IRF3 e IRF7 e no período de 8 horas, também comparando com o mock, verificou-se aumento de forma significativa na expressão de TLR 9, além de um aumento na expressão de TLR3, TLR7, TRAF3 , IRF7 e IFNβ.Verificamos ainda que, após escolher um gene housekeeping através de método estatístico, células A549 infectadas com APEUV em uma m.o.i.=1, tende a aumentara expressão dos genes IFNβ e TICAM-I, fundamentais na indução de um estado celular antiviral. Estudos posteriores são necessários para a determinação dos mecanismos envolvidos na resposta imune inata humana contra o Apeu virus...

Infecciones virales intestinales en pediatría / Intestinal viral infections in pediatrics

Los virus que causan diarrea en humanos generalmente muestran gran trofismo por las células epiteliales del intestino delgado. El mecanismo tradicionalmente aceptado es que estos agentes causan enfermedad destruyendo gran cantidad de entericitos maduros, (sea por lisis directa o induciendo la apoptosis) los que son reemplazados por células inmaduras provenientes de las criptas. Esto lleva a una absorción inadecuada de agua, electrolitos y nutrientes, con capacidad conservada de secretar cloro y agua. A diferencia de lo que ocurre frente a patógenos bacterianos invasores, la respuesta inflamatoria del huésped es leve y no contribuye significativamente en el mecanismo de la diarrea viral. Estudios posteriores han llevado a postular mecanismos adicionales, que no serían autoexcluyentes. Se ha descrito que algunas proteínas virales no estructurales actuarían como enterotoxina. Además, jugaría un rol la alteración de las uniones estrechas con aumento del flujo paracelular de agua y electrolitos, el aumento de la secreción intestinal mediada por neurotransmisores, y la microisquemia vellositaria. El impacto de la enteritis viral es mayor y la recuperación más lenta en niños previamente desnutridos. Se ha demostrado en animales de experimentación desnutridos un notorio retraso en la recuperación de la capacidad enzimática y absortiva de la mucosa intestinal frente a una enteritis viral, lo que refuerza la necesidad de una temprana y efectiva rehabilitación nutricional durante los episodios agudos de diarrea. Es ampliamente conocido que la lactancia materna, disminuye la incidencia y severidad de las diarreas virales en niños, los primeros meses de vida.

Viruses that cause diarrhea in humans generally show great tropism due to epithelial cells of the small intestine. The traditionally accepted mechanism is that these agents cause illness by destroying large number of mature enterocytes (via direct lysis or by inducing apoptosis), which are replaced by immature cells coming from the crypts. This leads to an inadequate absorption of water, electrolytes and nutritients with conserved chloride and water secretion. In contrast to invasive bacterial pathogens, the host infl amatory response is mild and it does not contribute significantly to the mechanism of viral diarrhea. Subsequent studies have leaded to postulate additional mechanisms that would not exclude each other. It has been described that some non-structural viral proteins may act as enterotoxin. In addition, the alteration of the tight junctions with an enhanced paracellular flow of water and electrolytes, the increase of neurotransmitter mediated intestinal secretion, and the micro-ischemia of villi would also play a role. The impact of viral enteritis is larger and the recovery slower in previously undernourished children. Studies carried out on undernourished experimentation animals have demonstrated a notorious delay in the recovery of the enzymaticand absorptive capacity of intestinal mucosa after viral enteritis, which reinforces the need for early and effective nutritional rehabilitation during episodes of acute diarrhea. It is well-known that the breastfeeding reduces the incidence and severity of viral diarrheas in children during the first months of life.

Enteritis virales en adultos inmunocompetentes, agentes clásicos y emergentes / Viral enteritis in immunocompetent adults: classic and emergent agents

Objetivo: Revisar aspectos epidemiológicos y clínicos de las enteritis de etiología viral en pacientes adultos inmunocompetentes. Resumen: La diarrea aguda infecciosa (enteritis) es una patología relevante en todo el mundo y aún es responsable de una alta mortalidad en niños y elevada morbilidad en adultos. En pacientes adultos inmunocompetentes la etiología viral es frecuentemente subestimada aunque la mayoría de las enteritis agudas son causadas por virus. Los agentes virales más frecuentemente identificados son el Norovirus, Rotavirus, Astrovirus, y Adenovirus. Su principal vía de contagio es la ruta fecal-oral y el cuadro clínico suele ser en su gran mayoría leve y autolimitado, con manifestaciones clínicas similares e inespecíficas: diarrea acuosa, náuseas, vómitos y dolor abdominal. Adultos mayores y pacientes inmunosuprimidos pueden presentar cuadros más severos y prolongados. El tratamiento es fundamentalmente sintomático. La prevención se basa en tomar medidas sanitarias y limitar el contagio de persona a persona. Virus respiratorios emergentes como SARS e InfluenzaA-H1N1, con frecuencia comprometen el tracto gastrointestinal y en períodos de epidemia deben ser considerados en el diagnóstico diferencial de enteritis aguda.

Objective: To review epidemiological and clinical aspects of viral enteritis in immunocompetent adult patients. Abstract: Acute infectious diarrhea (enteritis) is a worldwide important disease and it still accounts for high mortality among children and high morbidity among adults. In immunocompetent adult patients the viral etiology is frequently underestimated, although the most common cause of acute enteritis is avirus. The mos frequently identified viral agents are Norovirus, Rotavirus, Astrovirus, and Adenovirus. The main mechanism of spread of the disease is fecal-oral transmission and the clinical setting is commonly mild and self-limited, with clinical manifestations that are similar and unspecific: aqueous diarrhea, nausea, vomiting and abdominal pain. Elderly and immunosupressed patients may show more severe and prolonged episodes. Treatment is mainly symptomatic. Prevention is based on taking sanitary measures and reducing person-to-person transmission. Emerging respiratory viruses as SARS and A-H1N1 influenza frequently compromise the gastrointestinal tract and during epidemic periods these viruses should be considered in differential diagnosis of acute enteritis.

Infecciones respiratorias agudas en el lactante: diagnóstico etiológico desde la perspectiva clínica / Acute respiratory infection in infant: etiological diagnosis from the clinical perspective

La mejoría en la identificación etiológica de las infecciones respiratorias agudas bajas se debe a la incorporación rutinaria de métodos inmunológicos de diagnóstico rápido. El rendimiento se relaciona con la selección apropiada del paciente de acuerdo al cuadro clínico y la oportunidad de la solicitud, fundamentalmente en el caso de los virus respiratorios. La interpretación de aquellos casos en que las técnicas diagnósticas disponibles no permiten la demostración etiológica requiere considerar agentes microbiológicos de descripción reciente.

Infectious diarrhoea--an update.

Infectious diarrhoea is one of the most common illness affecting mankind. Recent advancement have led to detailed understanding of causative agents and the pathogenesis of the infections. Fluid and electrolyte replacement remains the most important aspect of treatment. The role of antimicrobial agents is discussed.

Infecciones virales en huéspedes comprometidos: II Parte. Virus ARN / Viral infections in compromissed host: II Part. ARN viruses

En este artículo: 1) se presenta al virus de la inmunodeficiencia humana causante del síndrome de inmunodeficiencia adquirida, SIDA, y las drogas antivirales e inmunomoduladoras que están en estudio o aprobadas para su tratamiento y el de las infecciones virales oportunistas que afectan a este tipo de pacientes; y 2) se revisan otros virus cuyo genoma es ARN y que infectan a huéspedes comprometidos, señalándose las medidas preventivas y terapéuticas susceptibles de ser aplicadas en ellos